Определение видового состава альтернариозов

Идентификация возбудителей альтернариозов в большинстве случаев начинается с визуального анализа симптомов заболевания: бурые округлые или угловатые пятна без зональности.

Перед помещением во влажную камеру поверхность растительного материала промывают дистиллированной водой. Материал можно помещать непосредственно на фильтровальную бумагу либо на какие-либо подставки. Влажные камеры выдерживаются при 20-25°С. Анализ спороношения рекомендуется проводить с использованием бинокуляра раз в сутки до появления обильного спороношения возбудителя болезни. Виды Alternaria обычно формируют конидии во влажной камере через 2-5 суток инкубирования. После обнаружения конидий под бинокуляром, приготавливают микропрепарат, который просматривают под микроскопом (рисунок 6).

Перед изоляцией грибов в чистую культуру проводят стерилизацию поверхности изучаемого образца (семена, фрагменты листьев, корней и т.п.) одним из стандартных методов с применением различных антисептических веществ: 0,1% водный раствор нитрата серебра, 96% этанол, 1% раствор марганцовокислотного калия, 1% раствор гипохлорита натрия и т.д. Затем растительный материал раскладывает в чашки Петри с картофельно-морковным (КМА) агаром и инкубируют при комнатной температуре.

Спороношение разных видов Alternaria при изоляции описанными выше способами формируется через 3-10 суток. Его появление можно наблюдая чашки Петри под микроскопом. Отсев изолятов удобно осуществлять путем переноса стерильной иглой отдельных конидий или нескольких конидий из одной цепочки в чашки Петри с КМА.

Состав питательной среды является наиболее важным моментом в методике идентификации видов Alternaria. Чаще всего для получения типичного спороношения используются 2 среды: КМА и V-8. Мы используем КМА.

Рисунок 6 -Определитель Симмонса [Ганнибал, 2011, с.3]

Для идентификационных целей подходит температура в пределах 20-25°С. Снижение температуры культивирования может приводить к снижению интенсивности спороношения и образованию более крупных конидий. Более высокая температура также ингибирует спороношение (рисунок 7).

Для нормального роста и спороношения грибов необходимо использование питательной среды с pH 6-7. Кислотность стандартных питательных сред обычно находится в указанном диапазоне, поэтому чаще всего этот параметр не фиксируют. Отклонение pH среды от нормальной может оказывать заметное влияние на культурально-морфологические свойства видов Alternaria:на скорость роста, текстуру и цвет колоний [Ганнибал, 2011, с.18].

Рисунок 7 - 14-дневные конидии A. helianthi на питательной среде КМА [Фото Ивебор М.В., 2012]

Еще статьи

Учение о биосфере. Основные среды жизни и условия существования организмов
Слово "экология" происходит от двух греческих слов: oikos, что означает дом, родина, и logos ― понятие, учение. В буквальном смысле экология ― это "наука о местообитании". "Под экологией, ― писал Геккель, ― мы понимаем сум ...