Определение видового состава альтернариозов

Идентификация возбудителей альтернариозов в большинстве случаев начинается с визуального анализа симптомов заболевания: бурые округлые или угловатые пятна без зональности.

Перед помещением во влажную камеру поверхность растительного материала промывают дистиллированной водой. Материал можно помещать непосредственно на фильтровальную бумагу либо на какие-либо подставки. Влажные камеры выдерживаются при 20-25°С. Анализ спороношения рекомендуется проводить с использованием бинокуляра раз в сутки до появления обильного спороношения возбудителя болезни. Виды Alternaria обычно формируют конидии во влажной камере через 2-5 суток инкубирования. После обнаружения конидий под бинокуляром, приготавливают микропрепарат, который просматривают под микроскопом (рисунок 6).

Перед изоляцией грибов в чистую культуру проводят стерилизацию поверхности изучаемого образца (семена, фрагменты листьев, корней и т.п.) одним из стандартных методов с применением различных антисептических веществ: 0,1% водный раствор нитрата серебра, 96% этанол, 1% раствор марганцовокислотного калия, 1% раствор гипохлорита натрия и т.д. Затем растительный материал раскладывает в чашки Петри с картофельно-морковным (КМА) агаром и инкубируют при комнатной температуре.

Спороношение разных видов Alternaria при изоляции описанными выше способами формируется через 3-10 суток. Его появление можно наблюдая чашки Петри под микроскопом. Отсев изолятов удобно осуществлять путем переноса стерильной иглой отдельных конидий или нескольких конидий из одной цепочки в чашки Петри с КМА.

Состав питательной среды является наиболее важным моментом в методике идентификации видов Alternaria. Чаще всего для получения типичного спороношения используются 2 среды: КМА и V-8. Мы используем КМА.

Рисунок 6 -Определитель Симмонса [Ганнибал, 2011, с.3]

Для идентификационных целей подходит температура в пределах 20-25°С. Снижение температуры культивирования может приводить к снижению интенсивности спороношения и образованию более крупных конидий. Более высокая температура также ингибирует спороношение (рисунок 7).

Для нормального роста и спороношения грибов необходимо использование питательной среды с pH 6-7. Кислотность стандартных питательных сред обычно находится в указанном диапазоне, поэтому чаще всего этот параметр не фиксируют. Отклонение pH среды от нормальной может оказывать заметное влияние на культурально-морфологические свойства видов Alternaria:на скорость роста, текстуру и цвет колоний [Ганнибал, 2011, с.18].

Рисунок 7 - 14-дневные конидии A. helianthi на питательной среде КМА [Фото Ивебор М.В., 2012]

Еще статьи

Экология Урала
В мире есть природные ресурсы, необходимые человечеству, как воздух. Но нет, пожалуй, такого ресурса, кроме самого воздуха, отсутствие которого становилось бы неразрешимой проблемой для человека уже менее чем через минуту, не существует. Воздух нужен для жизни подав ...